【摘要】 本发明公开一种GHGKHKNK八肽的制备工艺，以2-氯-三苯甲基树脂、三苯甲基树脂作树脂、4-甲基三苯甲基树脂或4-甲氧基三苯甲基树脂为起始原料，按固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护八肽树脂，其间依次脱去Fmoc-保护基团，用TBTU或HBTU及HOBT为缩合剂进行接肽反应，同步进行脱侧链保护基团及切肽，获得该八肽化合物粗品；再经C18或C8柱分离纯化，冷冻干燥后，制得精品；本发明还提供了以GHGKHKNK八肽为主要活性成分在制备抗肿瘤药物中的用途。 【专利类型】发明授权 【申请人】北华大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】131000 吉林省吉林市丰满区华山路3999号 【申请人地区】中国 【申请人城市】吉林市 【申请人区县】丰满区 【申请号】CN200810050685.5 【申请日】2008-05-07 【申请年份】2008 【公开公告号】CN101270145B 【公开公告日】2010-10-13 【公开公告年份】2010 【授权公告号】CN101270145B 【授权公告日】2010-10-13 【授权公告年份】2010.0 【IPC分类号】C07K1/06; C07K1/04; A61K38/08; A61P35/00 【发明人】杜培革; 田丹; 安立萍; 姜爽; 韩笑; 徐广宇; 宋见喜; 张成义; 申野; 孙静辉; 吕刚; 李坦 【主权项内容】一种GHGKHKNK八肽的制备工艺，包括如下步骤：(1)制备Fmoc-Lys(Boc)-树脂将2-氯-三苯甲基树脂、4-甲基三苯甲基树脂、4-甲氧基三苯甲基树脂或三苯甲基树脂，用DMF浸泡10-60分钟，使树脂充分溶胀，加DIPEA或DMPA和Fmoc-Lys(Boc)-OH，10～15℃反应1～24小时；再加入甲醇10～50℃反应1～20小时，氮气吹干，树脂用DMF洗涤，获得Fmoc-Lys(Boc)-树脂；所说的树脂取代量为：0.3-1.5mmol/g；粒径为100～400目；Fmoc-Lys(Boc)-OH的摩尔数为树脂的2～5倍；DIPEA或DMPA的摩尔数为树脂的2～20倍；甲醇的摩尔系数为树脂的2～20倍；(2)制备Fmoc-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂：在步骤(1)的Fmoc-Lys(Boc)-树脂中，加入脱帽试剂，10～50℃反应10～60分钟，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干，加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Asn(Trt)-OH、TBTU/HBTU和HOBT的混合物，10～50℃反应1～5小时，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干，得到Fmoc-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂；所说的脱帽试剂为：PIP∶DMF＝1∶2～5，体积比；脱帽试剂的加入量以树脂的重量为基准为5-20ml/g；混合物中：Fmoc-Asn(Trt)-OH的摩尔系数为树脂的2～5倍；TBTU/HBTU和HOBT的摩尔系数为树脂的2～5倍；所说的接肽试剂为：NMM∶DMF＝1∶5～15，体积比；接肽试剂中，Fmoc-Asn(Trt)-OH的摩尔系数为树脂的2～5倍；“TBTU/HBTU和HOBT”指的是：TBTU与HOBT的混合物，或者是HBTU与HOBT的混合物；(3)制备Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂：在步骤(2)的Fmoc-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂中，加入脱帽试剂，反应，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干；加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Lys(Boc)-OH、TBTU/HBTU和HOBT的混合物，反应，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干，获得Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂；混合物中：Fmoc-Lys(Boc)-OH的摩尔系数为树脂的2～5倍；其余操作以及工艺条件同步骤(2)；(4)制备Fmoc-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂：在步骤(3)的Fmoc-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂中，加入脱帽试剂，反应，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干；加入用接肽试剂溶解的Fmoc-His(Trt)-OH、TBTU/HBTU和HOBT的混合物，反应，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干，获得Fmoc-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂；混合物中：Fmoc-His(Trt)-OH的摩尔系数为树脂的2～5倍；其余操作以及工艺条件同步骤(2)；(5)制备Fmoc-Lys(Boc)-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂：在步骤(4)的Fmoc-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂中，加入脱帽试剂，反应，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干；加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Lys(Boc)-OH、TBTU/HBTU和HOBT的混合物，反应，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干，获得Fmoc-Lys(Boc)-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂；混合物中：Fmoc-Lys(Boc)-OH的摩尔系数为树脂的2～5倍；其余操作以及工艺条件同步骤(2)；(6)制备Fmoc-Gly-Lys(Boc)-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂：在步骤(5)的Fmoc-Lys(Boc)-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂中，加入脱帽试剂，反应，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干；加入用接肽试剂溶解的Fmoc-Gly-OH、TBTU/HBTU和HOBT的混合物，反应，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干，获得Fmoc-Gly-Lys(Boc)-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂；混合物中：Fmoc-Gly-OH的摩尔系数为树脂的2～5倍；其余操作以及工艺条件同步骤(2)；(7)制备Fmoc-His(Trt)-Gly-Lys(Boc)-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂：在步骤(6)的Fmoc-Gly-Lys(Boc)-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂中，加入脱帽试剂，反应，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干；加入用接肽试剂溶解的Fmoc-His(Trt)-OH、TBTU/HBTU和HOBT的混合物，反应，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干，获得Fmoc-His(Trt)-Gly-Lys(Boc)-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂；混合物中：Fmoc-His(Trt)-OH的摩尔系数为树脂的2～5倍；其余操作以及工艺条件同步骤(2)；(8)制备Boc-Gly-His(Trt)-Gly-Lys(Boc)-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂：在步骤(7)的Fmoc-His(Trt)-Gly-Lys(Boc)-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂中，加入脱帽试剂，反应，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干；加入用接肽试剂溶解的Boc-Gly-OH、TBTU/HBTU和HOBT的混合物，反应，吹干，分别用DMF和乙醇洗涤，吹干，获得Boc-Gly-His(Trt)-Gly-Lys(Boc)-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂；混合物中：Boc-Gly-OH的摩尔系数为树脂的2～5倍；其余操作以及工艺条件同步骤(2)；(9)制备Gly-His(Trt)-Gly-Lys(Boc)-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)在步骤(8)Boc-Gly-His(Trt)-Gly-Lys(Boc)-His(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Lys(Boc)-树脂中，加入遇冷至10～20℃的切肽试剂，10～50℃反应1～5小时，减压蒸去除溶剂，加入乙醚沉淀，收集沉淀物，用乙醚洗，P2O5真空干燥，获得粗品；所说的切肽试剂的组分为：TFA/EDT/HO/TIS＝90-95/2-5/1-5，体积比。。： 【当前权利人】北华大学 【当前专利权人地址】吉林省吉林市丰满区华山路3999号 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】12220000413126664J 【引证次数】2.0 【他引次数】2.0 【家族引证次数】2.0 【家族被引证次数】3
