【摘要】 本发明涉及一种乙肝乙脑联合疫苗及其制备方法，本发明使用的乙肝疫苗为CHO细胞表达的乙肝病毒表面抗原和酿酒酵母菌表达的乙肝病毒表面抗原，经纯化、佐剂吸附、配制成乙肝疫苗，本发明使用的乙脑疫苗为灭活疫苗或减毒活疫苗，优选的乙脑疫苗为灭活疫苗，乙脑灭活疫苗是在Vero细胞或二倍体细胞上接种获得的乙脑病毒抗原，经纯化、佐剂吸附、配制成乙脑疫苗，本发明的联合疫苗含有乙肝疫苗和乙脑疫苗，其中乙肝疫苗∶乙脑疫苗的重量比为1∶1。 【专利类型】发明授权 【申请人】崔栋 【申请人类型】个人 【申请人地址】101400 北京市怀柔区雁栖经济开发区南四街23号 【申请人地区】中国 【申请人城市】北京市 【申请人区县】怀柔区 【申请号】CN200810007682.3 【申请日】2008-03-06 【申请年份】2008 【公开公告号】CN101234199B 【公开公告日】2010-07-21 【公开公告年份】2010 【授权公告号】CN101234199B 【授权公告日】2010-07-21 【授权公告年份】2010.0 【IPC分类号】A61K39/295; A61K39/29; A61K39/12; C07K14/02; C07K14/18; A61P31/20; A61P31/14 【发明人】崔栋 【主权项内容】一种乙肝乙脑联合疫苗，其特征在于：该疫苗是将乙肝病毒表面抗原和乙脑病毒抗原，分别进行氢氧化铝佐剂吸附后，按重量比1∶1的比例进行混合得到的联合疫苗，其中，乙肝疫苗的制备方法：1)CHO细胞表达的乙肝病毒表面抗原制备；2)CHO细胞复苏、扩增培养；3)收获培养液；4)进行色谱柱层析方法纯化；5)甲醛灭活；6)样品稀释、佐剂吸附；半成品；首先建立细胞的主细胞库和工作细胞库，菌种主种子批、工作种子批，并对细胞库和菌种进行全面的检定，在制备乙肝表面抗原前，需要对细胞进行扩增，细胞培养液采用DMEM培养液加入2～10％灭能小牛血清；收获的抗原纯化后，经甲醛灭活、佐剂吸附成半成品；乙脑疫苗的制备方法：1)细胞的复苏；二倍体细胞的复苏、培养扩增；2)单层细胞接种乙脑病毒毒种；3)收获病毒液；4)病毒液的灭活；5)超滤纯化、蔗糖密度梯度区带离心、Sepharose-4FF凝胶柱纯化；6)佐剂吸附，半成品；首先建立细胞种子库和工作库，并对细胞库细胞进行系统的检定，在制备疫苗之前，需先进行细胞的复苏，培养和扩增，以达到生产批量的需要，细胞培养液由加入牛血清的199培养液，平衡盐配制而成，pH7.0-7.6，在37±0.5℃进行细胞培养扩增，培养过程中，当细胞长成致密单层后，即可接种乙脑病毒，培养72小时，即可收获病毒，对收获的病毒液及时测定病毒滴度，滴度在107LD50/ml以上，收获的病毒液经甲醛灭活，超滤浓缩，用36％和45％(W/W)的蔗糖密度梯度，23000rpm超速离心4小时，经过对紫外吸收峰的抗原含量，蛋白浓度的分析，确定了病毒所在的位置，然后再经过Sepharose 4FF纯化，加入保护剂人血白蛋白和氢氧化铝佐剂，即成为乙脑纯化疫苗，其中所用乙脑病毒为P3株和SA14-14-2株。 【当前权利人】崔栋 【当前专利权人地址】北京市怀柔区雁栖经济开发区南四街23号 【家族被引证次数】1
