【摘要】 本发明提供了基于银纳米探针无标记比色测定酶的方法，属于分析化学技术领域。首次利用免标记银纳米探针发展了一种简便但灵敏度好、选择性高的酶反应比色检测方法。用此比色方法，可以通过银纳米探针颜色的变化来监测牛小肠碱性磷酸酶催化的去磷酸化反应和牛心蛋白激酶A催化的磷酸化反应。该方法对牛小肠碱性磷酸酶的检测限为1unit/mL，对牛心蛋白激酶A的检测限为0.022unit/mL。尤为重要的是，该方法还可用于酶活性抑制的分析和复杂生物样品中酶含量的检测。本发明的方法具有的简单、灵敏、便宜等优点外，且用银纳米而不是金纳米作为比色探针，进一步拓宽了比色传感器的研究和应用范围。 【专利类型】发明授权 【申请人】中国科学院长春应用化学研究所 【申请人类型】科研单位 【申请人地址】130022 吉林省长春市人民大街5625号 【申请人地区】中国 【申请人城市】长春市 【申请人区县】南关区 【申请号】CN200810051163.7 【申请日】2008-09-12 【申请年份】2008 【公开公告号】CN101358926B 【公开公告日】2010-09-29 【公开公告年份】2010 【授权公告号】CN101358926B 【授权公告日】2010-09-29 【授权公告年份】2010.0 【IPC分类号】C12Q1/00; G01N21/78; G01N21/25 【发明人】魏辉; 陈朝贵; 韩冰雁; 汪尔康 【主权项内容】基于银纳米探针无标记比色测定酶的方法，具体涉及测定牛小肠碱性磷酸酶的方法，其步骤如下：(1)参考Doty，R.C.；Tshikhudo，T.R.；Brust，M.；Fernig，D.G.，Extremely stable water-soluble Ag nanoparticles.Chem.Mater.2005，17，(18)，4630-4635所述的方法合成银纳米探针；(2)将5mM三磷酸腺苷和牛小肠碱性磷酸酶加入到反应缓冲溶液中，混合均匀，37℃水浴反应20min；所述的5mM三磷酸腺苷∶牛小肠碱性磷酸酶∶反应缓冲溶液的体积比为1∶1∶4；所述的反应缓冲溶液为含1mM MgCl2的pH 9.0的50mM三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液；所述的牛小肠碱性磷酸酶浓度为0.001unit/μL到0.1unit/μL；若进行比色反应的特异性测定，将牛小肠碱性磷酸酶替换为25μM牛血清白蛋白、或10μMα-凝血酶、或2.1μM胰蛋白酶即可；(3)向(2)中的反应液中加入银纳米探针和0.5M NaCl水溶液；所述的5mM三磷酸腺苷∶银纳米探针∶0.5M NaCl水溶液的体积比为1∶40∶3；(4)将(3)中反应液，与水混合均匀，马上测定反应溶液的吸收光谱，或者直接用肉眼观察溶液的颜色变化，完成基于银纳米探针无标记比色测定酶的方法，具体涉及测定牛小肠碱性磷酸酶的方法；所述的(3)中反应液∶水的体积比为1∶3。 【当前权利人】常州储能材料与器件研究院 【当前专利权人地址】江苏省常州市河海东路9号 【统一社会信用代码】121000006051000987 【家族被引证次数】8
