【摘要】 本发明的内容是从植物的食用油中提取DNA，用于转基因成分的检测。本方法的特点是：在DNA提取之前先采用有机的乳化剂进行较长时间的乳化，把含量极低的DNA从脂溶性油脂中充分游离出来，完成成功提取的第一步，再利用自主研发的独特缓冲体系(提取缓冲液：100mM Tris.HCl，pH8.0；20mMEDTA；500mM NaCl；1.5％SDS；4％PVP)使DNA充分释放和聚集，有别于传统的CTAB裂解，酚/氯仿抽提，然后在carrier RNA共沉剂下经异丙醇沉淀，再经第二次异丙醇沉淀，从大离心管转移至小离心管，最大限度的获得食用油中含量极低的DNA，溶于40μl溶解缓冲液中，取9μl作为模板用于20μl的PCR反应体系。本方法快速、便捷、安全，效率高、稳定性好，适用于以植物为原料的食用油的转基因成分检测。。 【专利类型】发明授权 【申请人】天根生化科技(北京)有限公司 【申请人类型】企业 【申请人地址】100083 北京市海淀区成府路35号北陆楼 【申请人地区】中国 【申请人城市】北京市 【申请人区县】海淀区 【申请号】CN200810167544.1 【申请日】2008-10-10 【申请年份】2008 【公开公告号】CN101358189B 【公开公告日】2010-12-29 【公开公告年份】2010 【授权公告号】CN101358189B 【授权公告日】2010-12-29 【授权公告年份】2010.0 【IPC分类号】C12N15/10; C12Q1/68 【发明人】柯海燕 【主权项内容】从以植物为原料的食用油中提取用以转基因成分检测的DNA的方法，由下述步骤组成：(1)样品预处理：取食用油30ml，加入等体积乳化剂，于磁力搅拌器上搅拌2‑3小时；其中，乳化剂为正己烷；(2)取经预处理后的溶液10ml于大离心管，加5ml提取缓冲液，涡旋振荡1分钟后，室温静置10分钟；其中，提取缓冲液组成为：100mM pH8.0的Tris.HCl、20mM EDTA、500mM NaCl、1.5％SDS和4％PVP；(3)加入2ml乙酸钠缓冲液，充分混匀，涡旋振荡1分钟后，室温静置10分钟；其中，乙酸钠缓冲液组成为：3M乙酸钠和11.5％冰乙酸；(4)10, 000rpm离心10分钟，将下层水相转移至新的大离心管中；(5)向水相溶液中加入10μl Carrier RNA和0.7倍体积的异丙醇，充分混匀，10, 000rpm离心10分钟，弃上清，保留沉淀；(6)向大离心管中加入700μl超纯水，涡旋振荡15秒，加入700μl异丙醇，涡旋振荡15秒，简短离心，将溶液转移到新的小离心管中；(7)12, 000rpm离心5分钟，弃上清；(8)加入700μl 70％乙醇，涡旋振荡5秒，12, 000rpm离心5分钟，弃上清；(9)开盖倒置，室温放置10min，彻底晾干残余的乙醇；(10)加入40μl洗脱缓冲液TE，旋涡振荡1分钟，最终得到食用油DNA溶液。。： 【当前权利人】天根生化科技(北京)有限公司 【当前专利权人地址】北京市海淀区成府路35号北陆楼 【专利权人类型】外商投资企业 【统一社会信用代码】91110108777650264L 【家族被引证次数】1
