【摘要】 本发明涉及一种滇紫草细胞超低温冻存保藏的方法。其操作步骤主要包括：1.细胞冻 存前预处理和脱水过程；2.细胞在液氮中的冻存阶段；3.冻存细胞的解冻过程；4.细胞解冻 后的复苏培养。利用该超低温冻存方法对滇紫草细胞进行保藏，细胞解冻后可以获得较高 的存活率，是保存滇紫草种质资源的有效手段。 【专利类型】发明授权 【申请人】昆明理工大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】650093云南省昆明市五华区学府路253号 【申请人地区】中国 【申请人城市】昆明市 【申请人区县】五华区 【申请号】CN200810058876.6 【申请日】2008-09-04 【申请年份】2008 【公开公告号】CN100582221C 【公开公告日】2010-01-20 【公开公告年份】2010 【授权公告号】CN100582221C 【授权公告日】2010-01-20 【授权公告年份】2010.0 【发明人】葛锋; 陈朝银; 韩本勇; 熊向峰 【主权项内容】1.一种滇紫草细胞超低温冻存方法，其特征在于该方法的操作步骤包括： 1)滇紫草细胞的继代培养：用继代培养基，培养条件为固体培养，pH值5.6，温度 25℃，避光培养； 2)滇紫草细胞超低温处理前的预培养：将继代培养8-11天的细胞转移至含5-10％二 甲亚砜的继代培养基上预培养4-8天； 3)脱水处理：以甘油15-30％、乙二醇10-20％、二甲亚砜5-10％、MS基础培养基余量 和蔗糖0.3-0.6mol/L为组分，配成冷冻保护剂，将细胞放入15-25℃冷冻保护剂中处理15-30 min，然后在0℃预冷30min； 4)冷冻过程：将预冷好的细胞和冷冻保护剂一块投入液氮中冻存； 5)解冻过程：从液氮中取出冻存细胞，在10-25℃水浴中进行解冻，然后用含0.5-1.0 mol/L蔗糖浓度MS培养基对细胞进行洗涤，去除冷冻保护剂； 6)细胞的复苏：解冻后，经过洗涤的细胞转入继代培养基中进行恢复培养； 上述继代培养基成分为：MS基础培养基+NAA 1.0mg/L+2，4-D 0.2mg/L。 【当前权利人】昆明理工大学 【当前专利权人地址】云南省昆明市五华区学府路253号 【统一社会信用代码】125300004312044864 【家族被引证次数】3
