【摘要】 一种新城疫病毒HN基因和F基因重组乳酸菌的构建，属于生物 技术领域，其特征是：1.新城疫病毒F48E9株HN基因和F基因的克隆 与序列分析，2.新城疫病毒重组表达载体pW425et-HN和pW425et-F 的构建及在大肠杆菌中的表达，3.重组质粒pW425et-HN和pW425et-F 在乳酸菌中的表达。有益效果是：外源基因F和HN在乳酸菌中获得 了表达，并且具用反应原性，而且重组基因工程乳酸菌可以增强机体 对新城疫病毒的粘膜免疫。利用这一平台也可将其它引起禽类高度接 触性传染病的病原微生物的保护性抗原基因转入益生的乳酸菌中，使 其表达。 【专利类型】发明申请 【申请人】吉林农业大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】130118吉林省长春市新城大街2888号吉林农业大学动物科技学院 【申请人地区】中国 【申请人城市】长春市 【申请人区县】南关区 【申请号】CN200810051042.2 【申请日】2008-08-01 【申请年份】2008 【公开公告号】CN101638661A 【公开公告日】2010-02-03 【公开公告年份】2010 【授权公告号】CN101638661B 【授权公告日】2012-09-12 【授权公告年份】2012.0 【发明人】王春凤; 宁军; 肖冲; 任谓明 【主权项内容】1、一种新城疫病毒HN基因和F基因重组乳酸菌的构建，其特征是： a、新城疫病毒F48E9株HN基因和F基因的克隆与序列分析 根据Genebank中NDV F48E9株的HN基因序列和F基因序列，分别设计出带 有SacI和KpnI酶切位点的一对引物，应用RT-PCR方法扩增出HN基因和F基因， 并将其克隆至pMD-18T载体中，进行核苷酸序列分析； b、新城疫病毒重组表达载体pW425et-HN和pW425et-F的构建及在大肠杆菌中的 表达 SacI和KpnI双酶切重组质粒pMD18-T-HN和pMD18-T-F，将纯化的HN基因 和F基因亚克隆至双标记表达载体pW425et中，构建出可以在大肠杆菌与乳酸菌 之间穿梭表达的原核表达重组质粒pW425et-HN和pW425et-F；将pW425et-HN和 pW425et-F分别转化至thyA基因缺陷型的大肠杆菌感受态X13中，经过生长功 能弥补筛选阳性克隆，经SDS-PAGE分析，可见约66kD的融合蛋白和59kD的 融合蛋白；这与根据核苷酸大小计算的蛋白及融合蛋白之和的大小相符，说明外 源片段插入正确表达成功；Western-blot分析表明，融合蛋白能与NDV阳性血 清发生特异性反应，表明该重组蛋白具有较好的抗原性，从而为pW425et-HN和 pW425et-F在乳酸菌受体菌株中的表达提供实验基础； c、重组质粒pW425et-HN和pW425et-F在乳酸菌中的表达 应用电转化技术将已构建的新城疫病毒重组质粒pW425et-HN和pW425et-F 分别转化至嗜酸乳杆菌感受态中；对筛选到的阳性克隆，采用SDS-PAGE进行鉴 定，可见约66kD的融合蛋白和59kD的融合蛋白。 【当前权利人】吉林农业大学 【当前专利权人地址】吉林省长春市新城大街2888号吉林农业大学动物科技学院 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】122200004127535785 【被引证次数】TRUE 【家族被引证次数】TRUE
