【摘要】 本发明涉及基于基于金纳米探针和核酸适配子无标记比色测定 凝血酶的方法，属于分析化学技术领域。未结合凝血酶的核酸适配子 处于自由伸展状态，此单链的核酸适配子能够稳定金纳米保护其不被 所加入的盐聚集，此时金纳米为酒红色；相反，结合凝血酶后的核酸 适配子呈“四极子/双螺旋”结构，无法与金纳米作用，故不能保护 盐诱导的金纳米聚集，此时金纳米为天蓝色。这样，通过金纳米颜色 的变化，能够实现凝血酶的检测。本发明方法对于凝血酶的检出限为 0.83纳摩尔每升，线性范围是0纳摩尔每升到167纳摩尔每升。此种比 色方法检测凝血酶，选择性高、灵敏度高、操作简单、无需复杂仪器。 ： 【专利类型】发明申请 【申请人】中国科学院长春应用化学研究所 【申请人类型】科研单位 【申请人地址】130022吉林省长春市人民大街5625号 【申请人地区】中国 【申请人城市】长春市 【申请人区县】南关区 【申请号】CN200810051068.7 【申请日】2008-08-11 【申请年份】2008 【公开公告号】CN101672770A 【公开公告日】2010-03-17 【公开公告年份】2010 【IPC分类号】G01N21/25; C12Q1/68 【发明人】魏辉; 李冰凌; 李敬; 董绍俊; 汪尔康 【主权项内容】1、基于金纳米探针和核酸适配子无标记比色测定凝血酶的方 法，其特征在于，步骤和条件如下： (1)用参考文献方法合成13nm的金纳米探针(参考文献：Grabar， K，C.；Freeman，R.G.；Hommer，M.B.；Natan，M.J.，Preparation and Characterization of Au Colloid Monolayers.Anal.Chem.1995，67，(4)， 735-743)； (2)在含有140mM的NaCl和5mM的KCl的20mM pH＝7.5的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液中，配制4.59μM的核酸 适配子溶液；此核酸适配子的序列为5’AGT CCG TGG TAG GGC AGG TTG GGG TGA CT 3’； (3)将13nm的金纳米探针溶液和4.59μM的核酸适配子溶液 混合；所述的13nm的金纳米探针溶液：4.59μM的核酸适配子溶液 体积比为20∶3； (4)接着，将待测浓度的凝血酶加入至(3)的混合液中，反应 5min；所述的凝血酶溶液：13nm的金纳米探针溶液：4.59μM的核 酸适配子溶液体积比为3∶20∶3；待测凝血酶的浓度范围从0.83纳 摩尔每升到167纳摩尔每升； (5)向(4)中的反应液中，加入0.5M氯化钠溶液；加入氯化 钠溶液后，马上测定反应溶液的吸收光谱，或者直接用肉眼观察溶液 的颜色变化，完成基于金纳米探针和核酸适配子无标记比色测定凝血 酶的方法；所述的0.5M氯化钠溶液：13nm的金纳米探针溶液体积 比为1∶2。 【当前权利人】中国科学院长春应用化学研究所 【当前专利权人地址】吉林省长春市人民大街5625号 【统一社会信用代码】121000006051000987 【被引证次数】12 【被他引次数】12.0 【家族被引证次数】12
