【摘要】 本发明提供了一种通用、实时的核酸酶荧光检测方法，在核酸酶及其底物DNA的反应体系中加入含通用序列的单链核酸模板和通用分子信标核酸探针，并在DNA聚合酶作用下实时监测荧光信号，根据荧光信号的变化情况对核酸酶的活性进行分析，其中所述单链核酸模板3’端具有与核酸酶作用产物片段相结合的特异结合区，5’端具有与通用分子信标相结合的通用序列区，当通用分子信标被核酸酶作用产物片段延伸后取代下来时荧光淬灭，从而产生可检测的信号。本发明可通用、低廉、灵敏、准确地应用于各种基因检测体系和相关的核酸酶活性分析，不仅操作方便，而且费用大大降低，对于各种疾病早期检测、疗效评价、人群普查及遗传分析等均有很高的实用价值。 【专利类型】发明授权 【申请人】北京大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】100871 北京市海淀区颐和园路5号 【申请人地区】中国 【申请人城市】北京市 【申请人区县】海淀区 【申请号】CN200810114618.5 【申请日】2008-06-11 【申请年份】2008 【公开公告号】CN101328498B 【公开公告日】2010-10-27 【公开公告年份】2010 【授权公告号】CN101328498B 【授权公告日】2010-10-27 【授权公告年份】2010.0 【IPC分类号】C12Q1/44; C12Q1/48; C12Q1/68; G01N21/64 【发明人】赵美萍; 李晓敏; 宋晨; 李元宗 【主权项内容】一种核酸酶荧光检测方法，在核酸酶及其底物DNA的反应体系中加入含通用序列的单链核酸模板和通用分子信标核酸探针，并在DNA聚合酶作用下实时监测荧光信号，根据荧光信号的变化情况对核酸酶的活性进行分析，其中：所述核酸酶为DNA限制性内切酶或DNA磷酸激酶；所述单链核酸模板包括：a)特异结合区，位于单链核酸模板的3’端，用于特异性结合核酸酶与底物DNA相互作用的产物片段；b)通用序列区，位于单链核酸模板的5’端，用于与通用分子信标核酸探针相结合；所述通用分子信标核酸探针5’端标记荧光基团，3’端标记淬灭基团，该探针在游离状态下形成茎环的发卡结构时荧光淬灭，环部为15-30个碱基，茎部为4-7对互补碱基，环部或环部与5’端茎部或环部与两端茎部的序列与单链核酸模板的通用序列区互补；单链核酸模板的通用序列区与通用分子信标核酸探针结合的Tm值高于其特异结合区与核酸酶作用的产物片段结合的Tm值。 【当前权利人】北京大学 【当前专利权人地址】北京市海淀区颐和园路5号 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】12100000400002259P 【引证次数】2.0 【被引证次数】2 【他引次数】2.0 【被他引次数】2.0 【家族引证次数】2.0 【家族被引证次数】17
