【摘要】 本发明公开了一种制备萤火虫荧光素酶的方法。将萤火虫荧光素酶基因插入原核表达载体的多克隆位点，得到含有萤火虫荧光素酶基因的重组表达载体，将该重组表达载体导入大肠杆菌细胞，得到含有该重组表达载体的重组细胞，培养该重组细胞，表达得到萤火虫荧光素酶。本发明的制备萤火虫荧光素酶的方法具有过程简单、生长周期短、成本低廉、易于纯化、酶活性高和性能稳定等优点。可缓解虫荧光素酶主要依赖进口的局面，同时可以促进荧光法微生物快速检测系统的开发以及虫荧光素酶在医学、环境科学等方面的应用，为ATP生物发光微生物的快速检测以及其它方面的应用提供优质的酶制剂。。 【专利类型】发明授权 【申请人】清华大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】100084 北京市海淀区清华园 【申请人地区】中国 【申请人城市】北京市 【申请人区县】海淀区 【申请号】CN200810114823.1 【申请日】2008-06-12 【申请年份】2008 【公开公告号】CN101302502B 【公开公告日】2010-10-13 【公开公告年份】2010 【授权公告号】CN101302502B 【授权公告日】2010-10-13 【授权公告年份】2010.0 【IPC分类号】C12N9/02; C12N15/53; C12N15/70 【发明人】林金明; 肖勤 【主权项内容】一种制备萤火虫荧光素酶的方法，是将萤火虫荧光素酶基因插入原核表达载体pET28a的NdeI与XhoI酶切位点间，得到重组表达载体pET28a-luc，将该重组表达载体导入大肠杆菌BL21(DE3)细胞，得到含有该重组表达载体的重组细胞，培养该重组细胞，用IPTG诱导萤火虫荧光素酶基因的表达，其中，IPTG的浓度为1mmol/L，诱导时间为6h，诱导温度为22℃，摇瓶转速220r/min，旋转半径为30mm，表达得到萤火虫荧光素酶。 【当前权利人】清华大学 【当前专利权人地址】北京市海淀区清华大学 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】12100000400000624D 【家族被引证次数】6
