【摘要】 本发明涉及一种南极海洋芽孢杆菌n2a高产低温过氧化氢酶分离纯化方法，包括菌株摇瓶培养、超声破碎、硫酸铵沉淀，阴离子交换层析和凝胶过滤得到电泳纯低温过氧化氢酶。该方法工艺简单，快速效果好，用来分离纯化低温过氧化氢酶有效、可靠、经济。 【专利类型】发明授权 【申请人】中国水产科学研究院黄海水产研究所 【申请人类型】科研单位 【申请人地址】266071 山东省青岛市南京路106号 【申请人地区】中国 【申请人城市】青岛市 【申请人区县】市南区 【申请号】CN200810057970.X 【申请日】2008-02-22 【申请年份】2008 【公开公告号】CN101230338B 【公开公告日】2010-08-25 【公开公告年份】2010 【授权公告号】CN101230338B 【授权公告日】2010-08-25 【授权公告年份】2010.0 【IPC分类号】C12N9/08; C12N1/20; C12R1/07N; C12R1/07 【发明人】孙谧; 王跃军; 郑媛; 朱重昊 【主权项内容】一种南极海洋芽孢杆菌n2a高产低温过氧化氢酶分离纯化方法，其特征在于包括下列步骤：①将南极海洋芽孢杆菌n2a置于含有培养基的摇瓶中，于20-30℃，在摇床上培养至指数生长期晚期，后于0-10℃离心收集菌体，所述南极海洋芽孢杆菌n2a保藏于中国武汉中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M207079；②将步骤①收集菌体悬于Tris-HCl，pH7.5的缓冲液A中进行超声破碎，在0-4℃离心取上清液；③取步骤②的上清液中加入硫酸铵至40％饱和度，于0-4℃离心收上清液，再加硫酸铵至70％饱和度，于0-4℃离心收沉淀；④将步骤③的沉淀对缓冲液A透析过夜，离心取上清液，上阴离子交换柱，室温下用安玛西亚AKTA FPLC装置以1.0ml/分流速的缓冲液A平衡柱，再以0-0.3mol/LNaCl梯度洗脱收集活性组分；后用聚乙二醇2000浓缩后上柱，后用含0.15mol/L NaCl缓冲液A平衡洗脱，收集活性组分，聚乙二醇2000浓缩，得电泳纯低温过氧化氢酶; 所述培养基为每升蒸馏水含8克蛋白胨，5克NaCl和3克酵母浸膏培养基，pH6-10；所述阴离子交换柱为DEAE-sephadexA25阴离子交换柱，所述聚乙二醇2000浓缩后上柱为Sephacry/S200HR安玛西亚XK16/70柱。 【当前权利人】中国水产科学研究院黄海水产研究所 【当前专利权人地址】山东省青岛市南京路106号 【统一社会信用代码】12100000427405488J 【引证次数】3.0 【自引次数】3.0 【家族引证次数】3.0 【家族被引证次数】8
