【摘要】 一种微生物生物催化合成间苯三酚的方法，它涉及一种利用工程大肠杆菌细胞催化合成间苯三酚的方法。本发明按照下述步骤利用工程大肠杆菌细胞催化合成间苯三酚：利用HNO2和LiCl复合诱变筛选抗间苯三酚突变株；以细菌Pseudomonas fluorescens Pf-5基因组DNA为模板，PCR扩增获得多聚酮合成酶基因(phlD)；酶切后连接到pET载体上，转化到抗间苯三酚大肠杆菌突变株中，IPTG诱导表达目的蛋白，即可获得催化合成间苯三酚的工程大肠杆菌。工程大肠杆菌经发酵培养后，在发酵液中可获得间苯三酚，间苯三酚经萃取、浓缩后，即为制备好的间苯三酚。本发明首次通过工程大肠杆菌催化合成间苯三酚，为今后应用绿色合成工艺催化合成间苯三酚奠定坚实基础。 【专利类型】发明申请 【申请人】青岛生物能源与过程研究所 【申请人类型】科研单位 【申请人地址】266071 山东省青岛市南京路100号金华公寓B座3204 【申请人地区】中国 【申请人城市】青岛市 【申请人区县】市南区 【申请号】CN200810225401.1 【申请日】2008-10-29 【申请年份】2008 【公开公告号】CN101724662A 【公开公告日】2010-06-09 【公开公告年份】2010 【授权公告号】CN101724662B 【授权公告日】2012-08-15 【授权公告年份】2012.0 【IPC分类号】C12P7/22; C12N1/21; C12N15/52; C12N15/70; C12R1/19; C12P7/02 【发明人】咸漠; 杨建明; 李强; 徐鑫; 孟鑫; 张磊; 何玉财; 仝新利 【主权项内容】1.一种微生物催化合成间苯三酚的方法，其步骤为：A)利用HNO2和LiCl复合诱变筛选抗间苯三酚突变株；B)以Pseudomonas fluorescens Pf-5基因组DNA模版，定点突变phlD为phlD1基因，其登录序列号为EU554263；C)将phlD1基因酶切后，连接到pET载体上，转化到耐受间苯三酚大肠杆菌中，筛选获得阳性重组质粒，重组质粒在大肠杆菌中表达后，获得工程大肠杆菌，保藏编号CGMCCNo.2560，分类命名：大肠埃希氏菌；D)工程菌经发酵培养后，提取发酵液中的间苯三酚。 【当前权利人】青岛生物能源与过程研究所 【当前专利权人地址】山东省青岛市南京路100号金华公寓B座3204 【统一社会信用代码】123702007908081777 【被引证次数】12 【被他引次数】12.0 【家族引证次数】3.0 【家族被引证次数】16
