【摘要】 本发明的目的是利用一株于海洋环境的发光细菌菌株Photobacterium leiognathi YL(鳆发光杆菌 YL)胞内荧光光素酶和FMN : NADH氧化还原酶进行汞的定量检测。 本发明分离纯化出一株于海洋环境的发光细菌YL为革兰氏阴性杆菌，被鉴定为鳆发光杆菌 (Photobacterium leiognathi)。该菌株于2006年12月27日委托中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC) 保藏，保藏号为M 206139。该菌株的16S rDNA基因序列已经提交GenBank核酸序列数据库，存取号为 EF017227。 本发明通过提取发光细菌胞内荧光光素酶和FMN-NADH氧化还原酶粗酶制剂，建立一种荧光光素酶： FMN-NADH氧化还原酶体外发光的体系，实现了荧光光素酶：FMN-NADH氧化还原酶双酶体系在活体细 胞外的表达，通过重金属汞对双酶体系发光的抑制来测定汞的浓度。 本发明实现了荧光光素酶：FMN-NADH氧化还原酶在活体细胞外的表达，构建了荧光光素酶： FMN-NADH氧化还原酶体外发光体系。该体系发光性能稳定，发光强度高，底物配比简便可行，并可实 现汞的定量检测。利用本发明检测汞具有成本低、操作简便、灵敏度高等特点，能够满足汞的快速定量检 测的需要。 【专利类型】发明申请 【申请人】中国海洋大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】266003山东省青岛市崂山区松岭路238号 【申请人地区】中国 【申请人城市】青岛市 【申请人区县】崂山区 【申请号】CN200810157628.7 【申请日】2008-10-06 【申请年份】2008 【公开公告号】CN101625322A 【公开公告日】2010-01-13 【公开公告年份】2010 【发明人】王静雪; 林洪; 朱兰兰; 梅册霞; 王亚群 【主权项内容】1一种利用海洋发光细菌Photobacterium leiognathi YL菌株胞内荧光光素酶和FMN : NADH氧化还原 酶进行重金属Hg定量检测的方法。 其双酶体系特征是： (1)最佳底物配比：十二烷醛100μL(27mM)、FMN-Na53μL(10mM)和NADH 200μL(0.14mM)，体系 pH 7.0。 (2)发光检测在微弱发光仪中进行，检测条件是：设置波长474nm，1mL酶液中，快速加入各底物， 立刻进行定时跟踪测定，连续测定间隔时间为1s。 其检测体系特征是： 提取发光细菌胞内产物作为荧光光素酶和FMN-NADH氧化还原酶粗酶制剂进行重金属汞的定量测 定； 反应温度为4℃，反应时间为15min。 【当前权利人】中国海洋大学 【当前专利权人地址】山东省青岛市崂山区松岭路238号 【统一社会信用代码】12100000427403888T 【被引证次数】2 【家族被引证次数】2
