【摘要】 本发明涉及一种从瘤胃液或产阿魏酸酯酶菌培养液中提取阿魏酸酯酶的方法，该方法包括以下步骤：1)过滤离心；2)超滤浓缩；3)加热；4)离子交换层析；5)疏水层析；6)分子筛层析。本发明根据不同种类阿魏酸酯酶的不同理化性质，通过各种分离纯化步骤的有机结合，从成分较为复杂、阿魏酸酯酶种类较多的培养液或瘤胃液中提取各种具有阿魏酸酯酶活性的蛋白质，获得了高活性酯酶。利用本发明的方法，可提取得到多种阿魏酸酯酶，从而达到了较好的生产效果，在饲料工业中具有较高的实际应用价值。 【专利类型】发明授权 【申请人】中国农业大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】100083 北京市海淀区清华东路17号 【申请人地区】中国 【申请人城市】北京市 【申请人区县】海淀区 【申请号】CN200810056477.6 【申请日】2008-01-18 【申请年份】2008 【公开公告号】CN101215553B 【公开公告日】2010-07-28 【公开公告年份】2010 【授权公告号】CN101215553B 【授权公告日】2010-07-28 【授权公告年份】2010.0 【IPC分类号】C12N9/18 【发明人】杨红建; 岳群 【主权项内容】一种提取阿魏酸酯酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)过滤离心：将新鲜的瘤胃液或阿魏酸酯酶菌培养液经四层医用纱布过滤，滤液经20, 000×g 4℃离心30分钟，去除菌体沉淀，收集上清液；2)超滤浓缩：取上清液，通过截留分子量为100KDa的超滤膜超滤，收集＜100KDa的部分过10KDa的超滤膜超滤，弃去＜10KDa的部分，分别将10-100KDa和＞100KDa的部分浓缩10倍，制得较高纯度的酶液，用冰块控制该酶液温度在4-10℃之间；3)加热：根据不同阿魏酸酯酶的热稳定性不同，将超滤得到分子量在10-100KDa之间的浓缩液在50-70℃加热20-40分钟，10, 000×g 4℃离心10分钟，去除沉淀的变性蛋白；4)离子交换层析：对分子量＞100KDa的浓缩液和分子量在10-100KDa之间的去除变性蛋白的浓缩液进行透析，浓缩，过离子交换柱，未结合的部分用50mM pH 7磷酸钠缓冲液洗提，结合的蛋白质用梯度0-1M NaCl的50mM pH 7磷酸钠缓冲液洗提，收集有阿魏酸酯酶活性的部分，透析，浓缩，溶于适量1M(NH4)2SO4的50mM pH 7磷酸钠缓冲液；5)疏水层析：将离子交换层析后制得的酶液经疏水层析柱分离，未结合的部分用1M(NH4)2SO4的50mM pH 7磷酸钠缓冲液洗脱，结合的部分用梯度1-0M(NH4)2SO4的50mM pH 7磷酸钠缓冲液洗脱，收集有阿魏酸酯酶活性的部分，透析，浓缩，溶于适量50mM pH 7磷酸钠缓冲液；6)分子筛层析：将疏水层析后制得的酶液经分子筛层析柱分离，用50mM pH 7磷酸钠缓冲液等度洗脱，收集有阿魏酸酯酶活性的部分，浓缩，制得高纯度的阿魏酸酯酶。 【当前权利人】中国农业大学 【当前专利权人地址】北京市海淀区清华东路17号 【统一社会信用代码】12100000400018162G 【引证次数】1.0 【被引证次数】2 【他引次数】1.0 【被他引次数】2.0 【家族引证次数】1.0 【家族被引证次数】5
