【摘要】 本发明提供了一种检测X、Y精子分离纯度的引物，该引物是针对牛Y染色体上性别决定基因Sry通过PCR错配技术设计而成，通过该引物可扩增片段大小为295bp，为了防止假阳性出现，本发明根据牛3号常染色体报道序列设计了一对内标引物C34，扩增片段大小为208bp，通过上述两对引物对单个牛精子进行双重PCR扩增，然后根据对检测结果的统计分析，对分离精子纯度做出最终评价。本发明提供了一种成本低廉，操作简便、快速、准确的鉴定牛X、Y精子分离纯度的技术，为后续性控精液的推广应用及精子分离方法的优化提供一个可靠的技术支持。 【专利类型】发明授权 【申请人】中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 【申请人类型】科研单位 【申请人地址】100094 北京市海淀区圆明园西路二号 【申请人地区】中国 【申请人城市】北京市 【申请人区县】海淀区 【申请号】CN200810055708.1 【申请日】2008-01-07 【申请年份】2008 【公开公告号】CN101195842B 【公开公告日】2010-07-28 【公开公告年份】2010 【授权公告号】CN101195842B 【授权公告日】2010-07-28 【授权公告年份】2010.0 【IPC分类号】C12Q1/68; C12N15/11; C07H21/04 【发明人】王栋; 朱化彬; 郭家明; 程金华; 郝海生; 杜卫华; 张林波 【主权项内容】一种检测分离后X、Y精子纯度的方法，其采用检测引物Y12以及内标引物C34对牛单个精子DNA进行PCR扩增，并检测其扩增产物，对检测结果进行统计分析，判断分离后X、Y精子纯度，所述检测引物Y12的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1和2所示，所述内标引物C34的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.3和4所示，PCR反应条件为：94℃4min；94℃2S，51℃2S，72℃2S，35个循；72℃3min，采用碱性裂解液裂解精子，每管单精子加1μl碱性裂解液，65℃裂解10-20min获得单个精子DNA，所述裂解液的组成为500mmol/LKOH，125mmol/L DTT，采用如下反应体系进行扩增：成分 用量 终浓度10×buffer 1.5μl 1×bufferMgCl2 0.6μl 1.5mMdNTP 5μl 0.2mM引物Y12 2.25μl 180pM引物C34 2.25μl 180pMTris·HCl 2.5μl 96mMddH2O 8.2μl ——Taq酶 0.7μl ——模板 2μl ——。 【当前权利人】中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 【当前专利权人地址】北京市海淀区圆明园西路二号 【家族被引证次数】5
