【摘要】 本发明公开了一种乳腺特异性表达载体及其构建方法。本发明提供的乳腺特异性表达载体的构建方法，包括如下步骤：1)构建DNA片段M0；M0自上游至下游依次为同源臂T1-T6；2)将M0插入载体，得到连续三次基因抓捕载体；3)通过三次同源重组，T5和T6抓获乳蛋白基因座3’调控区；T3和T4抓获完整的外源目的蛋白基因组序列；T1和T2抓获乳蛋白基因座5’调控区。本发明得到了乳蛋白-目的蛋白的杂合基因座，杂合基因座内包含乳蛋白上下游表达调控序列，中间是外源目的蛋白的基因组序列。本发明将为动物乳腺个体表达系统注入新的活力，有力促进乳腺生物反应器表达系统的推广运用。 【专利类型】发明授权 【申请人】中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 【申请人类型】科研单位 【申请人地址】100071 北京市丰台区东大街20号生物工程研究所 【申请人地区】中国 【申请人城市】北京市 【申请人区县】丰台区 【申请号】CN200810105011.0 【申请日】2008-04-25 【申请年份】2008 【公开公告号】CN101265483B 【公开公告日】2010-09-29 【公开公告年份】2010 【授权公告号】CN101265483B 【授权公告日】2010-09-29 【授权公告年份】2010.0 【IPC分类号】C12N15/85; C12N15/14; C12N15/11; C12N5/10; C12N1/15; C12N1/19; C12N1/21; A01K67/027; C12N15/113; C12N15/66 【发明人】陈红星; 施庚寿; 吴晓洁; 周颜荣; 黄培堂 【主权项内容】乳腺特异性表达载体的构建方法，包括如下步骤：1)构建DNA片段M0；M0自上游至下游依次为同源臂T1、同源臂T2、同源臂T3、同源臂T4、同源臂T5、同源臂T6；所述6个同源臂的长度均为400-600bp；同源臂T5和同源臂T6能通过与乳蛋白BAC同源重组获得乳蛋白基因座3’调控区；同源臂T3和同源臂T4能通过与外源目的蛋白BAC同源重组获得完整的外源目的蛋白基因组序列；同源臂T1和同源臂T2能通过与乳蛋白BAC同源重组获得乳蛋白基因座5’调控区；2)将所述DNA片段M0插入载体中，得到连续三次基因抓捕载体；3)通过与所述乳蛋白BAC进行两次同源重组、与所述外源目的蛋白BAC进行一次同源重组，将步骤2)得到的连续三次基因抓捕载体中的DNA片段M0替换为DNA片段M1，得到所述外源目的蛋白的乳腺特异性表达载体；M1自上游至下游依次为所述乳蛋白基因座5’调控区、完整的所述外源目的蛋白基因组序列、所述乳蛋白基因座3’调控区。 【当前权利人】中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 【当前专利权人地址】北京市丰台区东大街20号生物工程研究所 【引证次数】3.0 【被引证次数】2 【自引次数】3.0 【被他引次数】2.0 【家族引证次数】3.0 【家族被引证次数】9
