【摘要】 本发明涉及一种通过花药培养获得马蹄莲(Zantedeschia aethiopica)单倍体植株的方法，属花卉育种技术领域。本方法步骤为：取蕾期马蹄莲幼小花蕾、消毒；取花药置于愈伤组织诱导培养基上培养、诱导小孢子形成愈伤组织；将愈伤组织置于芽诱导培养基上培养，诱导愈伤组织形成芽；将芽置于生根培养基上培养，诱导芽生根，获得马蹄莲单倍体植株。应用该方法对马蹄莲花药进行离体培养，其：平均2.4％的花药长出愈伤组织，平均每个愈伤组织能分化出6.8个芽，平均每芽生根11条，单倍体植株的比率为69.6％。本方法获得的马蹄莲单倍体植株经染色体加倍，只需要一个世代就获得遗传上稳定的纯系，通过产生单倍体植株而获得纯系是有效加速育种材料的纯化与育种进程的一条途径。 【专利类型】发明授权 【申请人】云南大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】650091 云南省昆明市五华区翠湖北路2号 【申请人地区】中国 【申请人城市】昆明市 【申请人区县】五华区 【申请号】CN200810058982.4 【申请日】2008-09-27 【申请年份】2008 【公开公告号】CN101385442B 【公开公告日】2010-12-08 【公开公告年份】2010 【授权公告号】CN101385442B 【授权公告日】2010-12-08 【授权公告年份】2010.0 【IPC分类号】A01H4/00; C12N5/04 【发明人】张乐民; 王世敏; 郑思乡 【主权项内容】一种通过花药培养获得马蹄莲单倍体植株的方法，包括外植体消毒、愈伤组织的诱导、愈伤组织分化芽及芽生根步骤；其特征在于本发明方法的具体步骤如下：a.供体马蹄莲材料的适宜生长季节为秋、冬季节，适宜生长温度为最高气温25℃，最低气温10℃；b.进行离体培养的花药及小孢子的合适发育时期：花蕾微露出叶柄、花药颜色呈乳白色、小孢子处在单核靠边期；c.外植体消毒：取小孢子处在单核靠边期的马蹄莲花蕾，剥去苞片，在超净工作台中，用1％次氯酸钠+0.05％Tween‑20消毒花蕊，时间为10分钟，然后用无菌水冲洗3次，冲洗时间分别为1分钟，5分钟，10分钟；d.愈伤组织的诱导：用解剖刀将经上述消毒的花药从花蕊上刮下，接种在愈伤组织诱导培养基上，愈伤组织诱导培养基配方为Gamborg B5+蔗糖80g/L+KT 1.0mg/L+2，4‑D 0.5mg/L+琼脂7g/L，培养基用母液配置，用1mol/LNaOH调pH到5.8，121℃15分钟高压灭菌，其中激素是过滤灭菌，在培养基分装前加入，高压灭菌后的培养基冷却到40℃时在超净工作台内快速分装在已高压灭菌的60x15mm的培养皿中，每皿装10mL愈伤组织诱导培养基，接种密度为60‑70个花药/培养皿，培养条件为32℃、暗培养2天后，转入25℃、暗培养50天，再将其转至上述愈伤组织诱导培养基，在25℃、黑暗条件下，进行继代培养20天，花药长出愈伤组织；e.愈伤组织分化芽：将上述继代培养20天后的愈伤组织置于芽诱导培养基，诱导生芽，芽诱导培养基配方为Murashige and Skoog+蔗糖30g/L+BA 1.0mg/L+NAA0.1mg/L+琼脂7g/L，pH5.8，培养条件：温度25℃，光强2000Lx，光照时间16小时，培养30天后愈伤组织分化出芽；f.芽生根：芽长到高4cm时，将芽置于生根培养基诱导生根，生根培养基配方为MS+蔗糖30g/L+IBA 0.5mg/L+琼脂7g/L，pH到5.8，在温度25℃，光强2000Lx，光照时间16小时的培养条件培养20天，小苗生根，形成马蹄莲单倍体植株。 【当前权利人】云南大学 【当前专利权人地址】云南省昆明市呈贡区大学城东外环南路 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】125300004312032649 【家族被引证次数】5
