【摘要】 本发明是铁皮石斛优质种苗快速繁殖方法。其方法为：(1)取铁皮石斛未展叶新芽，经灭菌将茎尖接种到固体培养基，建立无菌体系；(2)切取无菌体系幼苗的茎段或基部小组织块，在适宜的激素组合和培养基上，诱导出原球茎；(3)原球茎在液体和固体继代增殖培养基上交替培养，快速增殖形成原球茎团；(4)将原球茎团切开，转接到固体成苗培养基上分化植株，形成小苗；(5)将小苗转接到固体壮苗培养基上壮苗、生根，培育出完整的植株；(6)将无菌壮苗定植至适宜的炼苗基质中，获得优质种苗。本发明可用于大规模工厂化生产，具有外植体去污率高、增殖率高、变异率低、种苗粗壮、品质好、移栽后成活率高、生长势强等优势。。： 【专利类型】发明授权 【申请人】昆明理工大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】650093 云南省昆明市五华区学府路253号 【申请人地区】中国 【申请人城市】昆明市 【申请人区县】五华区 【申请号】CN200810058316.0 【申请日】2008-04-23 【申请年份】2008 【公开公告号】CN101258835B 【公开公告日】2010-06-16 【公开公告年份】2010 【授权公告号】CN101258835B 【授权公告日】2010-06-16 【授权公告年份】2010.0 【IPC分类号】A01H4/00; C12N5/04 【发明人】孔祥莹; 王丽斌; 戈振扬 【主权项内容】一种铁皮石斛优质种苗快速繁殖方法，其特征在于具体步骤如下：1)外植体诱导材料消毒的方法：在2-4月上旬，切取野生或人工栽培的铁皮石斛未展叶新芽，流水冲洗10～15分钟，将外植体在超净工作台上用75％的酒精浸泡45±5秒后，再用浓度为1克/升的氯化汞溶液、2～3滴吐温-80浸泡8分钟，无菌水冲洗3遍，用解剖刀剥除外部叶片，再放入浓度为1克/升的氯化汞溶液、2～3滴吐温80中浸泡5分钟，无菌水冲洗3遍，逐层剥去叶片直至露出生长点，接种到1/2MS固体培养基上萌发植株，建立无菌体系；2)原球茎诱导：切取无菌体系幼苗的茎段或基部小组织块接种到原球茎诱导培养基，原球茎诱导培养基为1/2MS+6-BA2.0-5.0毫克/升+NAA0.2-1.0毫克/升+马铃薯汁200克/升，含蔗糖20克/升，PH5.4-5.8，琼脂7克/升；3)继代增殖：将诱导出的原球茎接种到液体和固体增殖培养基上交替培养，增殖培养30天为一个继代周期；继代增殖液体培养基为：1/2MS+6-BA1.0-3.0毫克/升+NAA0.1-0.5毫克/升+马铃薯汁200克/升+活性炭0.2-0.5克/升，含蔗糖20克/升，PH5.4-5.8；继代增殖固体培养基为：1/2MS+6-BA1.0-3.0毫克/升+NAA0.1-0.5毫克/升+马铃薯汁200克/升+活性炭0.2-0.5克/升+琼脂7克/升，含蔗糖20克/升，PH5.4-5.8；4)成苗培养：将原球茎团转接到成苗培养基上，培养2-3周，形成小苗，成苗培养基为：1/2MS+6-BA0.1-0.5毫克/升+NAA1.0-2.0毫克/升+马铃薯汁200克/升+活性炭0.2-0.5克/升，含蔗糖20克/升，PH5.4-5.8，琼脂7克/升；5)壮苗生根培养：当无根苗高2-3厘米时，转接到壮苗生根培养基上培养，壮苗生根培养基为：1/2MS+NAA0.5-1.5毫克/升+香蕉匀浆100克/升+白糖30克/升+活性炭0.2-0.5克/升，PH5.4-5.8，含琼脂7克/升；6)试管苗移栽：当壮苗培养6周，试管苗能长至8-10厘米高，转移到自然光下炼苗7天后，将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，移入刨花+猪粪共同发酵后的混合基质中，保持适当的通风和足够的湿度，2周试管苗可恢复生长。 【当前权利人】昆明理工大学 【当前专利权人地址】云南省昆明市五华区学府路253号 【统一社会信用代码】125300004312044864 【被引证次数】7 【被他引次数】7.0 【家族被引证次数】37
