【摘要】 本发明涉及一种对虾白斑综合症病毒核酸等温扩增检测试剂盒及检测方法。是根据白斑综合症病毒基因保守区序列设计的一套LAMP引物为主体设计的。试剂盒汇集了WSSV检测所需的SEMP研磨液、核酸抽提液、UNG酶、TE缓冲液、酶解缓冲液和LAMP反应液等十一种试剂，实现了检测的程序化和标准化，因此本发明灵敏性极高，检出病毒的拷贝可低至26个，而且简便快速，安全，特异性好成本低，利用该试剂盒和检测方法仅需一个水浴锅即可在2小时内准确检测出对虾和养殖水体中的白斑综合症病毒。也解决了限制LAMP技术中的易被污染干扰的问题。有望替代对虾白斑综合症病毒之前的相关检测方法，如电镜观察法、TE染色法、病理切片法、抗体检测法、核酸探针杂交法和PCR检测法。 【专利类型】发明授权 【申请人】中国水产科学研究院黄海水产研究所 【申请人类型】科研单位 【申请人地址】266071 山东省青岛市市南区南京路106号 【申请人地区】中国 【申请人城市】青岛市 【申请人区县】市南区 【申请号】CN200810139949.4 【申请日】2008-09-07 【申请年份】2008 【公开公告号】CN101372714B 【公开公告日】2010-11-10 【公开公告年份】2010 【授权公告号】CN101372714B 【授权公告日】2010-11-10 【授权公告年份】2010.0 【IPC分类号】C12Q1/70; C12Q1/68 【发明人】黄倢; 张庆利; 宋晓玲; 杨冰; 刘莉 【主权项内容】 一种对虾白斑综合症病毒核酸等温扩增检测试剂盒，其特征是该试剂盒包括：(1)研磨液，1管，内装SEMP采样液；(2)核酸抽提液A，1管，内装乙酸钠；(3)核酸抽提液B，1管，内装无水乙醇；(4)核酸抽提液C，1管，内装70％的乙醇；(5)TE缓冲液，1管，内装TE缓冲液；(6)UNG酶，1管，内装尿嘧啶DNA糖基化酶；(7)酶解缓冲液，1管，内装尿嘧啶DNA糖基化酶的反应缓冲液；(8)LAMP反应液，1管，内装LAMP反应液；上述的LAMP反应液由以下组份组成：LAMP引物WSSV-FIP和WSSV-BIP各1～2μM，LAMP引物WSSV-F3和WSSV-B3各0.1～0.4μM，dATP、dGTP和dCTP各0.8～2.0mM，dTTP、dUTP各0.5～1.5mM，MgCl2 4～10mM，Betaine0.6～1.2M，Tris-HCl 10～40mM，KCl 10～20mM，MgSO4 1～4mM，(NH4)2SO4 6～12mM，Triton X-100 0.05％～1.0％；上述的LAMP引物的核酸序列如下：WSSV-FIP：5′-GCTGTTCTTCTTCTTCTTCTGCGTTTTAAATATGGATGAAGACACTTGG；WSSV-BIP：5′-GCCGTTGAACGAGTTTATAGTTTCTTTTGTTCTCTCATTACAAGAAGTCTC；WSSV-F3：5′-GACAACACTCTTCTTTCTTGAA；WSSV-B3：5′-ACGGGAAGAAGAATTTTGTG；(9)Bst DNA聚合酶，1管，内装Bst DNA聚合酶；(10)显色剂，1管，内装核酸染料GeneFinderTM；(11)阳性对照核酸，1管，内装对虾WSSV阳性DNA；(12)研磨棒，4支；(13)盒子；(14)一块泡沫板，置于盒子中，其上的若干小孔用于放置上述各小管；(15)试剂盒使用说明书，1份。 【当前权利人】中国水产科学研究院黄海水产研究所 【统一社会信用代码】12100000427405488J 【引证次数】1.0 【被引证次数】2 【他引次数】1.0 【被他引次数】2.0 【家族引证次数】1.0 【家族被引证次数】11
