【摘要】 本发明公开了一种精子染色质扩散实验检测精子DNA碎片的方法，其步骤如下：①精确配制精子裂解液；②将裂解液置入4℃保存2周，使用前1.5小时取出，置入22℃室温内；③将精液稀释至5-10×106/ml；④取稀释精液50微升放置在冰箱内5分钟，冰箱内温度为4℃；⑤冰箱内取出后将盖玻片移走，将载玻片水平浸入盐酸中变性7分钟取出；⑥步骤⑤中取走的载玻片再水平浸入步骤①中所述的精子裂解液中20分钟；⑦将步骤⑥中的载玻片用缓冲液冲洗5分钟；⑧用乙醇各2分钟脱水；⑨用瑞氏法或姬姆萨-瑞氏法或天蓝法染精子，在光学显微镜下观察分析精子DAN碎片。本发明方法实现了精子DNA检测简单、快速、准确、廉价、分辨率高的目的。 【专利类型】发明授权 【申请人】山东省计划生育科学技术研究所 【申请人类型】科研单位 【申请人地址】250002 山东省济南市市中区玉函路69号山东省计划生育科学技术研究所 【申请人地区】中国 【申请人城市】济南市 【申请人区县】市中区 【申请号】CN200810016505.1 【申请日】2008-05-28 【申请年份】2008 【公开公告号】CN101319251B 【公开公告日】2010-09-01 【公开公告年份】2010 【授权公告号】CN101319251B 【授权公告日】2010-09-01 【授权公告年份】2010.0 【IPC分类号】C12Q1/68; G01N1/30 【发明人】邱毅; 王磊光; 张丽红 【主权项内容】一种精子染色质扩散实验检测精子DNA碎片的方法，其特征在于：其步骤如下：①精确配制精子裂解液精子裂解液为每100毫升蒸馏水中含三羟甲基氨基甲烷4.844克、氯化钠11.7克、二硫苏糖醇1.86克、皂角提取物8.12克及乙二胺四乙酸二钠盐12.32克，PH值为7.5；②将裂解液置入4℃保存2周，使用前1.5小时取出，置入22℃室温内；③将精液稀释至5-10×106/ml，在室温37℃下将0.3ml的精液稀释，加入0.7毫升的1％低熔点琼脂糖内，混匀；④取稀释精液50微升置入用0.65％琼脂糖处理好的载玻片上，盖上22×22mm盖玻片，放置在冰箱内5分钟，冰箱内温度为4℃；⑤冰箱内取出后将盖玻片移走，将载玻片水平浸入0.08摩尔盐酸HCl中变性7分钟取出；⑥步骤⑤中取走的载玻片再水平浸入步骤①中所述的精子裂解液中20分钟；⑦将步骤⑥中的载玻片用缓冲液冲洗5分钟，缓冲液中各物质及含量为：三羟甲基氨基甲烷10.78克/升，硼酸5.5克/升及乙二胺四乙酸二钠盐0.58克/升；⑧用70％、90％、100％乙醇各2分钟脱水；⑨用瑞氏法或姬姆萨-瑞氏法染精子，在光学显微镜下观察分析精子DAN碎片。 【当前权利人】山东省计划生育科学技术研究所 【当前专利权人地址】山东省济南市市中区玉函路69号山东省计划生育科学技术研究所 【统一社会信用代码】123700004955410514 【引证次数】3.0 【自引次数】2.0 【他引次数】1.0 【家族引证次数】3.0 【家族被引证次数】9
