【摘要】 本发明公开了一种扬子鳄卵壳膜中提取DNA的试剂盒，包括以下试剂：试剂A、试剂B、试剂C、试剂D、试剂E、试剂F，及其试剂盒的使用方法，本试剂盒提取的模板DNA纯度好，可用于基因扩增测序和分型，在对12SrRNA基因、线粒体D-loop区、Cytb基因的扩增中，所有提取的壳膜DNA模板均能成功的扩增，得到与预期大小相同的片段产物，且浓度大，特异性强。在利用微卫星DNA标记特异性引物通过PCR扩增获得了分型数据，用于扬子鳄亲子鉴定。另外本方法还可以应用于其他卵生动物如龟鳖类，鸟类等DNA的提取。所得的模板DNA可广泛应用于卵生动物的种群遗传分析、分子进化、个体间亲缘关系进化等领域的各项研究。 【专利类型】发明授权 【申请人】安徽师范大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】241000 安徽省芜湖市弋江区花津南路安徽师范大学 【申请人地区】中国 【申请人城市】芜湖市 【申请人区县】弋江区 【申请号】CN200810122556.2 【申请日】2008-05-31 【申请年份】2008 【公开公告号】CN101368179B 【公开公告日】2010-12-22 【公开公告年份】2010 【授权公告号】CN101368179B 【授权公告日】2010-12-22 【授权公告年份】2010.0 【IPC分类号】C12N15/10; C12Q1/68 【发明人】吴孝兵; 胡芸; 晏鹏 【主权项内容】一种扬子鳄卵壳膜中提取DNA的试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒为：(a)试剂A：为保存液，含生理盐水、100mmoL/L葡萄糖、100U/ml青霉素、100U/ml链霉素；(b)试剂B：为预处理液，包括磷酸盐缓冲液B1及STE缓冲液B2，所述的磷酸盐缓冲液B1：含有137mM NaCl；2.7mM KCl；10mM Na2HPO4；2mM KH2PO4；所述的STE缓冲液B2：含有1M Tris‑HCl pH 8.0、0.5M EDTA、5M NaCl；(c)试剂C：裂解液1，含有50mM Tris‑HCl pH 8.0、1mM EDTA pH 8.0、150mM NaCl、1mol/L二硫苏糖醇DTT、浓度w/v为20％十二烷基苯磺酸钠SDS、20mg/ml蛋白酶K；(d)试剂D：裂解液2，含有20mg/ml蛋白酶K和质量浓度为0.2％β‑巯基乙醇；(e)试剂E：提取液1，含有饱和平衡酚、氯仿、异戊醇，其体积比为25∶24∶1；(f)试剂F：提取液2，含有氯仿、异戊醇，其体积比为24∶1。 【当前权利人】安徽师范大学 【当前专利权人地址】安徽省芜湖市弋江区花津南路安徽师范大学 【统一社会信用代码】123400004851237538 【家族被引证次数】12
