【摘要】 本发明公开了一种丙肝病毒特异性核酶M1GS-hcv/c76的构建方法，是选取丙型肝炎病毒HCV基因组5’UTR中77～89nt之间的序列作为靶位点设计引导序列，将引导序列与大肠埃希菌核酶P共价相联构建得到。本发明通过选择丙肝病毒77～89nt之间序列作为侯选靶位，成功设计引导序列与之有效结合，依此而设计的核酶对底物显示出明显的靶向切割活性，所述核酶的成功构建为后续的实验为提供准确可依的实验材料，从而为新型抗HCV药物及反义基因治疗的研究奠定基础。 【专利类型】发明授权 【申请人】广东药学院 【申请人类型】学校 【申请人地址】510006 广东省广州市大学城外环东路280号 【申请人地区】中国 【申请人城市】广州市 【申请人区县】番禺区 【申请号】CN200810026878.7 【申请日】2008-03-19 【申请年份】2008 【公开公告号】CN101255410B 【公开公告日】2010-11-17 【公开公告年份】2010 【授权公告号】CN101255410B 【授权公告日】2010-11-17 【授权公告年份】2010.0 【IPC分类号】C12N9/22; C12N15/51; C12N15/55; C12N15/63; A61K38/46; A61P31/12 【发明人】张文军; 李红枝; 邓祖军 【主权项内容】一种丙肝病毒特异性核酶M1GS-hcv/c76的构建方法，其特征在于包括以下步骤：(1)设计引导序列；选取丙型肝炎病毒HCV基因组5’UTR中77～89nt之间的序列作为靶位点来设计引导序列，所述靶点称为C76，该区序列为5’-GTCTAGCCATGGC-3’，针对C76靶点所设计的引导序列为：5’-GCCATGGCTAGAC-3’。(2)以含M1 RNA基因的pFL117质粒为模板，通过引物P1、P2进行PCR扩增，获得M1GS-HCV/c76的基因片段；所述引物为：P1：5’-GATGGTACCTAATACGACTCACTATA-3’；P2：5’-GTAAGCTTGGTGCCATGGCTAGACTGTGGAATTGTGAGC-3’；(3)以限制酶Kpn I和Hind III对所述基因片段及pUC19质粒载体进行双酶切，并通过T4 DNA连接酶将两者连接，构建得到含M1GS-HCV/c76基因的重组质粒；所述重组质粒的序列为SEQ ID NO：1。 【当前权利人】广东药学院 【当前专利权人地址】广东省广州市大学城外环东路280号
