【摘要】 本发明公开了一种运用实时荧光PCR技术鉴定剪股颖粒线虫(Anguina agrostis)的方法，利用剪股颖粒线虫特异性DNA序列，用生物信息学方法设计特异性引物和特异性探针，探针的5'端标记报告荧光基团，3'端标记淬灭荧光基团，应用荧光PCR法扩增剪股颖粒线虫靶基因，通过探针在反应过程中荧光信号的变化鉴定样品中是否含有剪股颖粒线虫。本发明不受虫龄和虫体数量的影响，较形态学和形态测量学鉴定方法更为快速、准确；操作简单，可标准化，解决了快速鉴定剪股颖粒线虫的标准方法的问题，大大节约了检测时间，加快了口岸草种的验放速度，促进了进出口贸易，节约了货物因长期在货场存放而产生的费用。 【专利类型】发明授权 【申请人】华南农业大学; 天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心 【申请人类型】机关团体,学校 【申请人地址】510642 广东省广州市天河区五山 【申请人地区】中国 【申请人城市】广州市 【申请人区县】天河区 【申请号】CN200810025752.8 【申请日】2008-01-11 【申请年份】2008 【公开公告号】CN101419169B 【公开公告日】2010-11-10 【公开公告年份】2010 【授权公告号】CN101419169B 【授权公告日】2010-11-10 【授权公告年份】2010.0 【IPC分类号】G01N21/64; C12Q1/68 【发明人】谢辉; 马以桂; 王金成; 黄国明 【主权项内容】一种运用实时荧光PCR技术鉴定剪股颖粒线虫的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)制备标准品的DNA模板，进行PCR扩增，回收扩增产物，测序，获得具有如表SEQ ID NO：1所示序列的基因，根据所述基因和引物序列设计并合成TaqMan探针，制备标准品质粒；所述引物序列为：引物序列一5’-CCACATGCAGTCGGTGTGAA-3；引物序列二5’-GTTTGCCTACCGGTTGTTTACG-3’；所述探针序列为：5’FAM-TCATGTCTTGGCTATTGTAGACGTATCTGA-TAMRA3’；(2)制备待测样品的DNA模板；(3)对待测样品DNA模板进行荧光PCR检测；(4)对标准品质粒进行荧光PCR检测，与步骤(3)结果进行阳性对照，得到检测结果。 【当前权利人】华南农业大学; 天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心 【当前专利权人地址】广东省广州市天河区五山; 天津市滨海新区港保税区京门大道158号 【专利权人类型】公立; 【统一社会信用代码】124400004554165634; 12100000717818379N 【引证次数】4.0 【自引次数】1.0 【他引次数】3.0 【家族引证次数】4.0 【家族被引证次数】3
