【摘要】 一种木糖醇生产菌株的筛选方法，涉及一种通过自然筛选得到的木糖醇高 产菌株的方法。该筛选方法由(1)筛选培养基配方；(2)液体菌种的制备；(3) 菌株筛选；(4)木糖的发酵；(5)发酵液的分离纯化工艺步骤组成，本发明采 用该筛选方法获得的木糖醇高产菌属于热带假丝酵母，生长速度快，木糖醇转 化率高，残糖低，是具有重要推广价值的菌种。 ： 【专利类型】发明申请 【申请人】山东福田药业有限公司 【申请人类型】企业 【申请人地址】251200山东省禹城市市中路1266号山东福田药业有限公司 【申请人地区】中国 【申请人城市】德州市 【申请人区县】禹城市 【申请号】CN200810140222.8 【申请日】2008-09-17 【申请年份】2008 【公开公告号】CN101676403A 【公开公告日】2010-03-24 【公开公告年份】2010 【IPC分类号】C12Q1/04; C12P19/02; C12R1/74; C12P19/00 【发明人】王星云; 邱学良; 秦海青; 杜瑞锋; 赵光辉 【主权项内容】1、一种木糖醇生产菌株的筛选方法，其特征是该筛选方法有以下工艺步骤 组成： (1)在在1L水中添加木糖1-20g、酵母粉0.1-1.0g、MgSO4·7H2O 0.1 -0.5g、CaCl2·2H2O 0.05-0.3g、KH2PO41-5g、(NH4)2SO42-10g，组成筛选培 养基； (2)液体菌种的制备：在1L水中添加MgSO4·7H2O 0.1-1.0g、CaCl2·2H2O 0.05-0.5g、KH2PO40.5-4.0g、(NH4)2SO41.0-8.0g、，另外在每升溶液中添加 木糖10-40g、葡萄糖10-50g、酵母膏5-20g，组成种子培养基；于无菌条 件下，在250ml三角瓶中，加入50-100ml上述种子培养基，并接入一环菌种， 在20-40℃，100-400r/min条件下振荡培养10-30h，得液体菌种； (3)菌株筛选：分别取木糖母液、木糖中间品、土壤三个菌种的样品 各1g，加入已编号的250ml三角瓶中，各三角瓶中再加入50ml纯水，于100 -400r/min，20-40℃下摇瓶富集20-50h，然后分别对三种摇瓶富集液做10-1、 10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8的梯度稀释，并涂布平板，于20-40℃的 生化培养箱中培30-60h后检测平板中的菌落分布和数量，发现稀释度为10-6 的效果最好；在涂布的平板中挑取单菌落划平板，经若干次平板划线分离纯化 后，挑取了30-45个菌株，并在2-6℃的麦芽汁培养基中保存；采用步骤(1) 中的液体筛选培养基对挑选的菌株做发酵试验，每隔24h检测一次，直至培养 基中木糖消耗殆尽，通过摇瓶试验筛得一株木糖醇高产菌，可以使发酵液中木 糖醇的含量达到80-100％； (4)木糖的发酵：在木糖中间品中按其干物含量的0.1-0.5％加入玉米浆 作为木糖醇高产菌的生长因子，按木糖中间品总量的1-5％加入硫酸铵作为氮 源，按木糖中间品总量的2-6％加入由步骤(2)培养得到的液体菌种，控制搅 拌转速为100-400r/min，发酵温度28-31℃，前20h通气量为3.5-3.9L/min， 以后通气量为1.1-1.4L/min，发酵总时间为68-72小时； (5)发酵液的分离纯化：发酵液停止搅拌静止3小时，菌体全部絮凝沉降， 将上清液放出，菌体回收继续发酵；将上清液加热到85-90℃，过滤除去蛋白质 等沉淀物，经蒸发浓缩，使木糖醇浓度达70-85％，采用梯度降温的办法，得到 高质量的结晶木糖醇产品。 【当前权利人】山东福田药业有限公司 【当前专利权人地址】山东省禹城市市中路1266号山东福田药业有限公司 【专利权人类型】有限责任公司 【统一社会信用代码】91371482723850543R 【被引证次数】6 【被他引次数】6.0 【家族被引证次数】6
