【摘要】 本发明涉及一种检测和评价树鼩被HCV(丙型肝炎病毒)体内、体外感染前后CD81分子变化情况的方法，更具体的说，涉及一种以克隆的树鼩CD81质粒为标准物，在此基础上建立的以Taqman探针荧光定量PCR的检测方法。属于分子生物学领域.。该方法包括对树鼩CD81基因片段的克隆；在克隆的CD81基因片段上利用Primer Express2.0软件设计合理的探针和引物；设计实验找到最优条件下的退火温度(Tm值)、引物浓度、探针浓度；进一步以树鼩CD81质粒为标准品以10倍梯度稀释建立了标准曲线；并且验证了该方法重复性、稳定性和灵敏性。最后用该检测体系，对HCV体外感染的树鼩原代肝细胞样品CD81的变化情况进行了检测。该方法可以准确、快速、便捷的检测出树鼩CD81的变化情况。 【专利类型】发明申请 【申请人】昆明理工大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】650093 云南省昆明市五华区学府路253号(昆明理工大学) 【申请人地区】中国 【申请人城市】昆明市 【申请人区县】五华区 【申请号】CN200810233735.3 【申请日】2008-12-22 【申请年份】2008 【公开公告号】CN101691602A 【公开公告日】2010-04-07 【公开公告年份】2010 【授权公告号】CN101691602B 【授权公告日】2012-01-25 【授权公告年份】2012.0 【IPC分类号】C12Q1/68 【发明人】夏雪山; 冯悦; 赵文华; 刘丽; 魏大巧 【主权项内容】1.一种以树鼩CD81基因构建的质粒为标准品的Taqman探针荧光定量PCR方法，包括对树鼩CD81基因片段的克隆并测序，通过T-A克隆技术构建了PMD-18T-CD81质粒，以克隆的树鼩CD81基因片段为目标，设计Taqman PCR引物和探针，设计实验找到最优条件下引物的退火温度、引物浓度、探针浓度，提纯该质粒并计算CD81基因片段拷贝数，以计算好的质粒用10倍梯度稀释，配制拷贝数为103～107copies阳性质粒建立标准曲线，用该检测体系对HCV体外感染的树鼩原代肝细胞样品CD81的变化情况进行检测。 【当前权利人】昆明理工大学 【当前专利权人地址】云南省昆明市五华区学府路253号昆明理工大学 【统一社会信用代码】125300004312044864 【被引证次数】8 【被自引次数】3.0 【被他引次数】5.0 【家族被引证次数】8
