【摘要】 本发明涉及的是一种生物工程技术领域的假单胞菌M18的RNA快速提取方法。包括如下步骤：收集106～107个细胞假单胞菌M18，加入变性液和氯仿，混匀，离心，菌液在管中分为三层；吸取500μl上层液体转移至硅膜柱中，并加入异丙醇，离心；加入乙醇至硅膜柱中，离心；重复上一步；再离心，保证硅膜柱内无液体；加入双蒸水、洗脱液至硅膜柱内；离心，用一干净离心管收集洗脱液。本发明提取时间大大缩短，从提取RNA的方法中可以看出：提取的时间在6min之内；没有DNA污染；提取过程易于自动化。对过柱条件优化后，提取出的RNA纯度很高；通过分光光度计测定提取出的RNA其吸光值A260/A280＝1.93。 【专利类型】发明授权 【申请人】上海交通大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】200240 上海市闵行区东川路800号 【申请人地区】中国 【申请人城市】上海市 【申请人区县】闵行区 【申请号】CN200810038830.8 【申请日】2008-06-12 【申请年份】2008 【公开公告号】CN101302508B 【公开公告日】2010-09-15 【公开公告年份】2010 【授权公告号】CN101302508B 【授权公告日】2010-09-15 【授权公告年份】2010.0 【IPC分类号】C12N15/10 【发明人】董德贤; 何静; 高倩; 卢奕; 李荣秀 【主权项内容】一种假单胞菌M18的RNA快速提取优化方法，其特征在于，包括如下步骤：①收集106～107个细胞假单胞菌M18，加入变性液和氯仿，混匀，离心，菌液在管中分为三层；②吸取500μl上层液体转移至硅膜柱中，并加入异丙醇，离心；③加入乙醇至硅膜柱中，离心；④重复上一步；⑤再离心，保证硅膜柱内无液体；⑥加入双蒸水、洗脱液至硅膜柱内；⑦离心，用一干净离心管收集洗脱液；所述的变性液，其制备方法为：a)取一个80ml的瓶子，称取固体异硫氰酸胍3.56g～7.12g，将其放入瓶子中；b)称取十二烷基肌氨酸钠0.02g～0.06g，并将其倒入瓶子中；c)配制0.75M柠檬酸钠溶液，吸取225μl～450μl放入瓶子，配制2M醋酸钠溶液，吸取300μl～600μl加入到瓶子中；d)配制14.3Mβ-巯基乙醇，吸取45μl～90μl加入到瓶子之中；e)加入饱和苯酚2ml～4ml；f)加入异戊醇100μl～200μl；g)用双蒸水定容至10ml；h)60℃水浴加热至完全溶解，然后用纯乙酸调节pH到3.5～4.0；i)放置在室温下备用。 【当前权利人】上海交通大学 【当前专利权人地址】上海市闵行区东川路800号 【统一社会信用代码】1210000042500615X0 【引证次数】8.0 【自引次数】2.0 【他引次数】6.0 【家族引证次数】8.0 【家族被引证次数】4
