【摘要】 一种可修复仔猪胰岛细胞的生产方法，其特征在 于：包括以下工艺步骤：(1).供体的选择：供体选择刚出生、 未哺乳健康仔猪，无菌下开腹取胰腺，去除包膜、血管、结缔 组织并置4℃ Hank`s液中；(2).胰岛细胞分离及纯化：通过机 械研磨使胰岛与外分泌组织分离。再通过Dextran不连续密度 梯度离心，得到胰岛细胞；(3).胰岛细胞培养：应用无血清微 球载体进行CO2培养，采用 RPMI－1640培养液，并加入纤维连接蛋白，在培养过程中， 将胰岛细胞包于APA生物膜内形成微球，在恒温37℃、 CO2培养箱内培养，48小时换一 次培养液，最终得到活性好、纯度高的微囊新生仔猪胰岛细胞。 【专利类型】发明申请 【申请人】郑州福恩生物工程技术有限公司 【申请人类型】企业 【申请人地址】450001河南省郑州市高新区冬青街7号河南省国家大学科技园9F－A02 【申请人地区】中国 【申请人城市】郑州市 【申请人区县】中原区 【申请号】CN200610107058.1 【申请日】2006-09-18 【申请年份】2006 【公开公告号】CN1920009A 【公开公告日】2007-02-28 【公开公告年份】2007 【授权公告号】CN100554407C 【授权公告日】2009-10-28 【授权公告年份】2009.0 【发明人】张俊英; 王斌; 王章存; 范清堂 【主权项内容】1、一种可修复仔猪胰岛细胞的生产方法，其特征在于：它包括以下工艺步 骤： (1)、胰岛细胞供体的选择：供体选择刚出生、未哺乳健康仔猪，无菌下开 腹取胰腺，去除包膜、血管、结缔组织并置4℃？Hank`s液中； (2)、胰岛细胞的分离及纯化：通过机械研磨使胰岛与外分泌组织分离。再 通过Dextran不连续密度梯度离心，得到胰岛细胞，取样镜检形态、活性纯度、 数量、成活率，从分离到纯化结束时间控制在4-6小时； (3)、胰岛细胞的培养：应用无血清微球载体进行培养，采用RPMI-1640 培养液，培养液中不含牛血清，并加入纤维连接蛋白(FN)，加入量按培养基体 积每升加FN？5---30mg，在培养过程中，将胰岛细胞包于A-P-A生物膜内形成 微球，适时检测微囊形态、活性、计数，在恒温37℃CO2培养箱内培养，48小时 换一次培养液，定期取培养液测定胰岛素含量；观察记录胰岛细胞在微囊内分 化、生长、分泌胰岛素功能来判定终止培养时间，最终得到活性好、纯度高的 微囊新生仔猪胰岛细胞。 【当前权利人】张俊英 【被引证次数】TRUE 【家族被引证次数】TRUE
