【摘要】 本发明公开了一种利用核特异荧光染色和子房 整体透明技术观察水稻胚囊的方法，其方法是用核荧光染色和 子房整体透明技术对水稻各个发育时期的胚囊和受精后各个 时期的胚胎发育过程进行观察；本发明是在染色前，先用一定 浓度的氢氧化钠溶液对水稻子房进行软化处理，然后利用细胞 核荧光染料DAPI与细胞核的特异结合来观察胚囊内各细胞及 细胞核的结构，在激光扫描共聚焦显微镜下胚囊内各细胞的细 胞核以及核仁发出明亮荧光，细胞轮廓比较清晰，层次感强， 能清晰观察到细胞的内部构造。不论是对开花前较小的胚囊材 料还是开花后较大的胚囊材料都取得了较好的观察效果。 【专利类型】发明申请 【申请人】代西梅 【申请人类型】个人 【申请人地址】450052河南省郑州市大学路郑州大学离子束生物工程实验室 【申请人地区】中国 【申请人城市】郑州市 【申请号】CN200610107043.5 【申请日】2006-09-13 【申请年份】2006 【公开公告号】CN1916609A 【公开公告日】2007-02-21 【公开公告年份】2007 【IPC分类号】G01N21/84; G01N21/17; G01N21/64; G01N1/30 【发明人】代西梅; 黄群策; 秦广雍; 李国平 【主权项内容】1、一种利用核特异荧光染色和子房整体透明技术观察水稻胚囊的方法， 其特征在于：其方法是用核荧光染色和子房整体透明技术对水稻各个发育时期 的胚囊和受精后各个时期的胚胎发育过程进行观察；方法如下，取水稻的颖花 用固定液固定，观察前将固定好的颖花用50％-75％的酒精冲洗一下，然后在 解剖镜下分离出子房，保存于70％-75％酒精中备用；染色前，各个时期的水 稻子房经各级浓度梯度下降的乙醇溶液直至蒸馏水处理，每次20min-30min； 然后用NaOH溶液或HCl溶液处理1-2h，蒸馏水冲洗后，再用0.5-1μg/ml 的DAPI溶液或Hoechst溶液染色10-24h；接着用乙醇溶液梯度脱水，每级 20min-30min；随后将子房放入无水乙醇中脱水至少两次，每次的脱水时间至 少1h，接着，再转入无水乙醇中脱水12h以上；然后将已经脱水的子房材料 在体积比为1∶1的无水乙醇和水杨酸甲酯组成的混合液中过渡至少1h，再用 水杨酸甲酯透明处理至少3次；在前两次透明时，每次至少2h，最后一次透 明的时间为15h以上；上述子房材料经过水杨酸甲酯透明处理后可以在水杨酸 甲酯中保存备用；观察前，将处理好的子房夹出，置于凹玻片上封片或小培养 皿上；将制备好的凹玻片置于荧光显微镜直接观察；或者，将制备好的凹玻片 或小培养皿置于激光共聚焦扫描显微镜上，用激光激发，扫描获得成熟胚囊和 胚胎发育过程的各个时期的清晰图片。 【当前权利人】代西梅 【当前专利权人地址】河南省郑州市大学路郑州大学离子束生物工程实验室 【被引证次数】9 【被他引次数】9.0 【家族被引证次数】9
